□刘 颖

   病理诊断是肿瘤诊断的“金标准”，同时也是临床医生进行治疗的依据，但是部分肿瘤患者在做完基础病理检查后还需要做分子检测吗？下面，笔者带大家了解分子检测那些事儿。
分子检测的基本概念
    肿瘤的病理诊断一般包含3个过程，先进行常规病理检查来判断肿瘤的良性或恶性；相对复杂的病例，需要加做免疫组化染色来辅助诊断。当这两种方法无法确诊，就要进行分子检测。
    随着我国分子生物学技术的飞速发展，对恶性肿瘤分子标志物等的检测也更加高效、精准。常见的分子检测技术主要是检测脱氧核糖核酸（DNA）、核糖核酸（RNA）、蛋白质的生物大分子序列信息、表达水平等。其中关于RNA的检测大部分还处在实验研究阶段，主要是不稳定、容易降解，但具有发现新融合基因的优点。分子检测可以对肿瘤分子的生物标志物进行完整图谱分析。相对于基因检测（容易出现遗漏）来说，分子检测会更加全面。
原位免疫荧光杂交检查
    FISH（原位免疫荧光杂交）检查虽然操作涉及较多的人工，检查过程相对复杂，且费用比较高等，但目前来说检测方法已经成熟，是检测的一个“金标准”，可用来判断基因融合、断裂、重排，或者用于染色体拷贝数量增多时的基因检测。FISH检查被广泛应用于肿瘤临床诊断工作中。
一代基因测序技术
    一代基因测序技术的仪器和技术比较成熟、稳定，且一次能对800个~1000个碱基的长度进行检测，准确度较好。其不足之处是通量低，不能对基因突变频率进行检测，比如当肿瘤存在异质性的时候，就无法对一次性基因数量特别多的基因进行检测。
二代基因检测技术
    二代基因检测技术是目前比较新的一种检测技术，其检测通量比较高、检测速度较快，可以全面测定基因组信息，也被叫作高通量测序技术，价格已经控制在万元以下。但是，由于全基因组测序通常要对正常细胞的DNA序列信息进行检测，且肿瘤具有异质性，因此在实际操作过程中经常需要进行多次反复检查。二代基因检测技术也存在一些问题，比如对血液中肿瘤细胞裂解物的DNA检测灵敏度不高，测序深度越高，出现测序错误等问题的概率越大。
各种PCR检测技术
    在肿瘤分子诊断领域中也在使用PCR（聚合酶链式反应）技术，其中第一代技术是传统的扩增技术；第二代技术是QPCR（定量聚合酶链式反应），比如可以使用QPCR来检测表皮生长因子受体的突变信息；第三代技术是ddPCR（微滴式数字PCR）的灵敏度和准确度很高。此外ARMS-PCR（突变扩增系统）相比传统的PCR技术，虽然只能对有限基因的已知位点进行检测，但具有特异性、灵敏度高等优点。
    对于患者来说，通常建议使用二代基因测序技术，不仅可以检测到突变信息，且费用相对较低，检测相对比较全面。对于不适宜选取组织样本及晚期肿瘤患者，需要综合考虑选择适合患者的检测技术。
    （作者供职于三门峡市中心医院病理科）